微孔板比色测定法在微量蛋白测定中的意义

    目的,确立一种精确、迅速的微克级蛋白质测定法.方式 以考马斯亮蓝做为显色剂,用酶标仪微孔板比色法与基本Bradford法、紫外吸收法、改良Lowry法同时测定98例样版蛋白含量,并较为检验结论的关联性.结果 改良微孔板Bradford法与常规Bradford法样品的测定结论相近,二者有优良的关联性.依据微孔板Bradford法是一种简易、迅速、灵巧的蛋白质测量方法,特别是在适用于成批试品、微量试品的蛋白质含量测得。

    蛋白是水产品的关键组分,其含量测量在水产品加工及探讨等方面运用极其普遍。现阶段,各蛋白含量迅速测量方法一般是在试管中进行反应并运用分光光度计测定,其操作流程较繁杂,解析成批试品时效率低,上述缺点在高通量筛选、检验等场合尤其突显。

    为了克服该不足,实现蛋白含量的快速高通量测定,本研究基于Folin-酚法,利用96孔板作为反应器并配合酶标仪比色,建立了一种蛋白含量测定的微孔板方法并评价其合理性。该法测得样品的蛋白含量与常规法结果无显著性差异,反应在40-95min显色稳定,标准曲线的线性相关系数R~2=0.8922,标准偏差范围为4.06%-5.73%,检测限为10μg。与常规法相比,微孔板法保持了Folin-酚法的准确性及稳定性,同时具备通量高、节约试品、试剂及测定时间等优势,在蛋白高通量快速测定方面具有优点。

    生物通联合BioTek在2013年重磅推出#微孔板秘笈，为您介绍微孔板相关检测产品的应用。4月我们将聚焦超微量检测，介绍核酸定量方法及原理，原位微量BCA蛋白定量法，以及通过原位微量PicoGreen法定量DNA浓度。传统标准的BCA 蛋白定量分析方法常规均应用试管或是微孔板开展检测，根据对传统方法进行改善，可应用BioTek 公司的Take3™ 超微量检测板进行原位微量BCA法蛋白定量分析。

    欢迎索取《BioTek微孔板相关检测产品应用手册》

    介绍

    传统标准的BCA 蛋白定量分析方法常规均使用试管或者微孔板进行检测，根据对传统方法开展改善，可应用BioTek 公司的Take3™ 超微量检测板进行原位微量BCA法蛋白定量分析。待测蛋白样品和BCA 工作缓冲液依照顺序直接加进Take3™板的微量定量孔处、温浴，应用Epoch™ 微孔板分光光度计进行检测。和传统标准BCA方法相比，该方法的蛋白检测灵敏度有明显的提高。相比Mini-BCA 分析法，该分析方法更加精确。

    BCA法是十分常用的蛋白质比色定量方法，许多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的BCA 蛋白定量试剂盒。BCA蛋白定量法相对于其它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优点。相对于蛋白质固有的290nm 吸收峰检验，BCA检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性，消除了核酸的干扰，核酸干扰在对细胞裂解物或别的生物样品开展蛋白定量时总是一个难以避免的干扰。在碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+ 与BCA 试剂形成紫色络合物，测定在562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

    近些年开发的一些精密的检测仪器，均可应用短光程、微量容积的样品开展比色定量，例如NanoDrop该仪器内置了蛋白质290nm 直接定量法，这种方法能够合理的节约使用样品且操作简单。在直接蛋白定量的基础上，这些仪器还发展了蛋白质比色定量法，例如BCA 法。通过调整蛋白质和BCA 工作缓冲液的相对体积比，由原来的30：1 调整为1：1，这种微量定量方法变换校准曲线的工作范围，使之更适合于微孔板或短光程检测，这种方法叫Mini-BCA 法。

    因此对于这种根据把样机加进检验基座上的设备而言，蛋白质和BCA 工作缓冲液务必先在1个额外的试剂槽里开展搅拌和温浴，随后能够滴加进检验基座上开展监测。那样会提升操作的多元性，提升了样品的浪费。

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